北京索莱宝科技有限公司 张净花 13426459985
关于血清使用中的常见问题解答
1, 血清存储方法?
血清一般储存于-20℃,同时应避免反复冻融。购买大包装的血清后,若无法一次用完,建议分装成小包装,储存于-20℃。
2, 如何解冻血清?
使用前融化,融化时最好先置于2-8℃冰箱中使之溶解,然后在室温下使之全溶,溶解过程
中必须规则地摇晃均匀。融化后的血清在4℃不宜长时间存放,应尽快使用。
3,血清的使用浓度是多大?
使用浓度一般为5-20%,最常用是10%。过多血清容易使培养中的细胞发生变化,特别是一些二倍体的无限细胞系,迅速生长之后容易发生恶性转化。
4,血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理?
血清中沉淀物的出现有许多原因,但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性造成的;而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成血清沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。 若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管中,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。
5.何谓热灭活?有必要做热灭活吗?
一般以56℃,30分钟水浴来处理已解冻的血清,因为此加热步骤,可以使补体去活性,而补体所参与的反应有:溶细胞活性,平滑肌的收缩,肥大细胞和血小板组胺的释放,增强吞噬作用,淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。
实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经过处理的血清对细胞生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质
量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者认为是微生物的分裂扩增。因此我们建议您,若非必须,您可以不需要做热灭活这一步。如此以来,不但节省您宝贵的时间,更确保您血清的质量!
6.如何避免沉淀物的出现?
我们建议您在使用血清的时候,注意正确的血清解冻步骤,并尽量避免灭活血清及长时间的将血清置于高温环境中。