果胶酶活性检测试剂盒 可见分光光度法
品牌：Solarbio | 货号：BC2630

产品内容：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。


产品说明：
       果胶酶（pectinase）是一类分解果胶质酶类的总称，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于植物果实和微生物中，主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。
      果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与 DNS 试剂反应生成红棕色物质，在540nm 有特征吸收峰，测定 540nm 处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

所需仪器和试剂：
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。


操作步骤：
酶提取：
1． 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2． 细菌、真菌：按照细胞数量（10 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间3min）；然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。
3． 细胞培养液等：直接检测。 

测定操作表:

 
 

酶活计算公式:
标准曲线：y = 0.1544x - 0.1537，R2 = 0.9996

1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在 50℃，pH3.5 条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性（mg/h/mg prot）=(△A+0.1537) ÷0.1544×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T =129.53×(△ A+0.1537)÷Cpr

2．按照样本质量计算
酶活性定义：在 50℃，pH3.5 条件下，每克样本每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性（mg/h /g）=(△A+0.1537) ÷0.1544×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T = 129.53×(△ A+0.1537)÷W

3. 按细胞数量计算
酶活性定义：在 50℃，pH3.5 条件下，每 10 细胞每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性（mg/h /104cell）= (△A+0.1537) ÷0.1544×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T = 129.53×(△ A+0.1537)÷细胞数量

4．细胞培养液
酶活性定义：在 50℃，pH3.5 条件下，每毫升培养液每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性（mg/h /mL）=(△A+0.1537) ÷0.1544×V 反总÷V 样÷T =129.53×(△A+0.1537)
V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，m

 
注意事项：
1. 试剂一若有沉淀析出，请置于 50℃加热溶解。
2. 测定之前请先做预实验，如果吸光值较高或较低，请用提取液做适当的稀释或者加大样本量，并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。
3. 煮沸样本建议在沸水中煮沸 10 分钟，以将酶彻底灭活。
 
相关文献： 《Transcription factor VmSeb1 is required for the growth, development, and virulence in Valsa mali》 作者:Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,Hao Feng,Lili Huang 期刊:Microbial Pathogenesis 影响因子:2.332 PMID:29959044
《Two members of the velvet family, VmVeA and VmVelB, affect conidiation, virulence and pectinase expression in Valsa mali》 作者:Yuxing Wu , Liangsheng Xu , Zhiyuan Yin , Qingqing Dai , Xiaoning Gao,  Hao Feng , Ralf T. Voegele , Lili Huang 期刊:Molecular Plant Pathology 影响因子:4.379 PMID:29127722