产品描述

Anti-Flag免疫磁珠（Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads）是一种聚合物磁性微球，由高质量的鼠源IgG单克隆抗体与carboxyl magnetic beads通过供价偶联制备，本产品具有快速的磁响应性，超顺磁性、良好的分散性、粒径均一、极低的非特异结合和丰富的结合位点等特点，可用于带有Flag标签的蛋白免疫沉淀（IP）。

Anti-Flag免疫磁珠（Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads）可结合Met修饰的N端Flag融合蛋白（Met-FLAG–Protein），N端Flag融合蛋白（FLAG–Protein），C端Flag融合蛋白（Protein-FLAG）。

产品性质

运输和保存方法

冰袋运输。2-8℃储存。避免冻存！有效期1年。

注意事项

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品仅作科研用途！

使用方法

以免疫沉淀（IP）为例，步骤如下：

1样品准备

样品可以是细菌发酵液或者细胞裂解液， 样品中不能含有颗粒不溶物，可以用0.22 μm滤膜过滤或10,000×g离心15 min。

2 磁珠预处理

2.1 用移液器轻柔吹打Anti-Flag免疫磁珠，使其充分混悬，取 25~50 µL 磁珠悬液置于1.5 mL离心管中。

2.2 加入500 µL IP Lysis/Wash Buffer并轻轻移液器混合，用移液器轻柔吹打重悬Anti-Flag免疫磁珠，接着在磁力架上静置1 min后，吸弃上清。

2.3 重复步骤 2.2 两次。

3样品的结合

3.1 在预处理后的磁珠中加入蛋白样品，置于翻转混合仪上孵育(常温2 h，4 ℃过夜)；

3.2 将上述混合液置于磁力架上静置1 min，然后把上清液转移到新的离心管中备用(上清液可用于检测Flag标签蛋白是否存在残留)，原离心管中剩余的即为 蛋白-磁珠复合物；

注意：结合过程中，磁珠可能会出现聚团或呈片状，属于正常现象，不会影响实验结果。

4洗涤

4.1 向步骤3.2所得的蛋白-磁珠复合物中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer ，用移液器轻柔吹打重悬，接着在磁力架上静置 1 min 后, 吸弃上清；

4.2 重复步骤4.1两次，直至洗涤后的上清液OD280小于0.05为止；

注意：如上清液的OD280仍大于0.05，则适当增加洗涤次数。

5蛋白洗脱

根据下游用途选择洗脱方法。

5.1 Flag融合蛋白洗脱

1） 配制Flag多肽洗脱液：TBS中溶解Flag多肽，终浓度为0.2-1 mg/mL。

2） 分别加入100 μL Flag多肽洗脱液，4 ℃孵育 2 h-6 h（慢慢摇晃）

3） 分离磁珠上的磁珠并保存含有目标抗原的上清液。

4） 重复洗脱步骤一次以获得更高的回收率

5.2 酸性洗脱（0.1 M Gly-HCl，pH 3.0）

1）加入100 μL 0.1 M Gly-HCl，pH 3.0，室温孵育5-10 min（慢慢摇晃）。

2）分离磁珠上的磁珠并保存含有目标抗原的上清液。

3）中和低pH，每100 μL洗脱液加入20 μL中和缓冲液(1M Tris pH8.5)。最后的溶液可以用作样品用于变性 SDS-PAGE。

5.3 用SDS-PAGE上样缓冲液洗脱

如需直接检测目的蛋白，则在上述洗涤过的蛋白-磁珠复合物中加入100 μL 1×SDS-PAGE上样缓冲液，煮沸 5 min，冷却至室温并在磁力架上静置 1 min 后，取上清进行 SDS-PAGE 检测。

HB230116